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从组织中获得高活性的单细胞悬液,你只需要gentleMACS这款神器!

时间:2018-09-10 作者:管理员 来源:本站 浏览:2009

从组织中获得高活性的单细胞悬液,你只需要gentleMACS这款神器!

entleMACS ——全自动温和组织处理器

自动化、标准化的样本制备方案 

 

快捷:全自动地组织解离,将组织处理成单细胞或匀浆;

稳定:标准化步骤,结果可靠,可重复性高;

   ▲灵活:预设程序及用户可自定义的程序,几乎可以处理所有类型的组织。

另有八通道组织处理器,同时处理8个样本,可根据需求设定不同的程序。


 

组织解离常用酶

1.1. 美天旎组织解离试剂盒

组织解离试剂盒,可以单独使用,与gentleMACS配合效果更佳哦!



快速:即用型组织解离试剂盒,无需摸索实验方案

稳定:预先滴定好浓度的酶溶液,无批次间差异,可重复的结果

温和:高纯度的酶 ,无非特异性胰蛋白酶活性 ,不会降解细胞表位

 

针对不同的组织,优化出不同的解离试剂盒。目前已有用于处理肿瘤、脑瘤、神经、脾脏、肝脏、新生儿心脏、表皮、骨骼肌、脂肪、表皮、脐带、皮肤、胚体肾脏、肺、前列腺等多种组织的解离试剂盒。更多组织样本,请联系福麦斯生物,给您最优的解离方案。

使用gentleMACS,不仅可以把组织解离成高活性的单细胞悬液,也可以制备组织匀浆,用于后续的蛋白和分子检测!

 

1.2. 胶原酶

胶原酶(collagenase)是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml(约为1mg/mL)或0.03%~0.3%。胶原酶分为型以及肝细胞专用胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

 

1.3. 胰酶

胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。

1.4. DNA水解酶

组织解离的过程可以会导致一些细胞死亡,死细胞分泌的DNA粘性比较大,所以在组织解离中会加入DNA水解酶使细胞分散。

 

2. 滤器  

小体积样品过滤(~200mL

2.1. Millex ® 针头式过滤器小量无菌过滤的金标准

 

不同膜材质用于过滤水溶液、有机溶液和气体

4, 13, 25, 3350mm直径等多种选择,适合不同体积样品的过滤

特别的全包围设计,耐压性好,操作轻松

微量的保留体积,保证最少的样品损失

全部为单个无菌独立包装,使用方便不浪费

 

 

特别提示

去除支原体,使用0.1μm Durpore膜的Millex®

除菌过滤100% DMSODMF溶液,使用0.2μm PTFE膜的Millex®

除菌过滤10%酚溶液,使用0.2μm PTFE膜的Millex®

气体除菌和无菌通气口,使用0.2μm PTFE膜的Millex®

澄清和预过滤,使用0.45μm或更大孔径的Millex® 

 

2.2. Smart Strainer滤器——去除单细胞悬液中的细胞团块和大颗粒

Smart Strainer滤器:

 

 

可以去除单细胞悬液和血液样本中的大颗粒或团块,以及细胞分选前粘连细胞的去除;

有更好的透气性,可有效避免过滤过程中滤器堵塞的问题;

适用于15ml50ml离心管;

无菌、即用,方便后续无菌应用。

 

2.3. 尼龙网

除了滤器,尼龙网也可过滤较大的团块和杂质,可用于脾脏等组织的研磨,也可和淋巴细胞分离液配套使用。

3. 混悬仪——保证样本的充分混合

MACSmix Tube Rotator(混悬仪)

产品描述

无菌

可反复充电,不需要插电源,除正常使用环境外,还可以直接放入培养箱或者冰箱中,避免反复开合培养箱带来的污染,也减少您的工作量,提供工作效率。

工作温度2℃-42℃2000mAh已充满的电池室温至少运行48小时。

2种不同的试管架:0.5 mL -2 mL5 mL -50 mL,可以根据不同

实验需求更换。

▲0.5mL-2mL的试管,可同时处理16个;5mL-15mL的试管,可同时

处理8个;50mL的试管,可同时处理4个。

内设5种程序,可选择不同转速及是否间断。

关机键,LED灯绿色闪动时表面正在充电,停止闪动表面充电已经完成。

 

应用

酶消化、抗体孵育、磁珠孵育等

▲MACS细胞因子分泌细胞研究

培养箱中试管细胞的短时间培养

免疫沉淀

物质溶解、相分离、抽提等

 

 

肿瘤样品制备

 

分别采用gentlemacs组织处理系统或者酶消化结合手工解离的方法从15例病人样本中获得TILs(肿瘤浸润淋巴细胞)。用gentlemacs组织处理系统获得的TILs表现出更高的扩增潜能。   

 

A)使用genltemacs组织处理系统处理头颈鳞癌病人肿瘤样

本,获得TILs后进行流式分析;

B)对野生型C57BL/6小鼠原位注射同源胰腺癌细胞。大约四周后,取出肿瘤并使用genltmacs组织处理系统制备单细胞悬液,然后用流式分析髓系细胞亚群。

 

 

神经样品制备

 

 

针对不同的样本,可以选择不同的组织

解离试剂盒,如下表所示

使用成年鼠脑组织解离试剂盒(ABDK)获得高得率、高活性、高纯度的神经细胞。成年鼠大脑经解离得到的单细胞悬液含有大量的细胞碎片和红细胞(AB),这会妨碍下游的细胞分选、培养和分析等实验。ABDK优化了试剂和组织解离方法,获得的单细胞悬液中仅含有少量的细胞碎片和红细胞(CD)。

 

石蜡样品制备

福尔马林固定的石蜡包埋切片(Formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE))通常会被用于提取DNA,进而做测序研究。但是,常规方法无法将其中的肿瘤细胞和正常细胞区分开,更无法辨别其DNA序列,因此,测序结果很难精确。

为此,美天旎研发出一套FFPE样本的解离方案,能够:

 

温和解离50umFFPE切片组织样本

与传统处理方法相比,操作时间更短

保留完整的细胞抗原表位

完美兼容后续的细胞分选,获得高纯度的肿瘤细胞

确保肿瘤细胞测序结果的精确性和可靠性

 

 

专于细胞肿瘤免疫,精于流式磁珠分选