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细胞养不好,考虑过支原体污染吗?

时间:2018-09-10 作者:管理员 来源:本站 浏览:1059

培养细胞时,

发现细胞增殖变慢、

形态渐渐改变,

是血清或培养基的问题吗?

很有可能是你的细胞污染了。。。。。。。

 

 

支 原 体 污 染

细胞污染可分为细菌、霉菌、酵母菌、支原体污染,其中支原体污染发生的概率>50%支原体(Mycoplasma) 是最小的原核生物,约0.1-0.3μm,可穿透0.22-0.45 μ过滤膜 (BI血清经过30.1μm滤膜并且检测支原体)

支原体污染棘手的原因之一是没有如其他污染源“立即可辨”的现象,支原体污染侵袭细胞但是并不一定致死。如果您的细胞出现如下状态:增殖变慢、形态变差、培养液变黄但是没有浑浊,说明您的细胞可能正遭受支原体的摧残!!

受支原体污染的293T

正常无污染的293T

 

支 原 体 检 测

怎么知道您的细胞正遭受支原体摧残呢,常见的检测方法几种:

1.分离培养法

将可疑样本接种到支原体培养基中,观察菌落生成。缺点:培养时间长,须3~5周才能判断。

2.PCR

利用特异性引物,经PCR反应检测支原体DNA,灵敏且快速。

BI EZ-PCR支原体检测试剂盒:

  • 采用PCR法,简化了细胞培养中支原体污染的检测过程,可检测出细胞培养实验中常见的支原体污染。

  • 试剂盒中包含独特的反应混合液,以及PCR中需要的所有试剂。使用者只需备有样品,最后产物跑完胶后,如有一个270bp的片段,则代表有支原体污染,整个检测过程耗时约4小时。

 

 

 

支 原 体 污 染 处 理

细胞培养常见的支原体污染为6种: 发酵支原体(M.fermentans),唾液支原体(M.salivarum),口腔支原体(M.orale),精氨酸支原体(M.arginini),猪鼻支原体(M.hyorhinis),莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)等,有些是动物来源,有些是人来源,支原体没有细胞壁,所以使用青霉素等破坏细胞壁类药物不具效用,建议使用专为支原体开发的处理试剂保护您珍贵的细胞。

  1. 支原体污染处理试剂:

上述处理试剂可去除90%以上实验室常见的支原体污染 (支原体非单一物种,无单一试剂能100%去除支原体污染),不具细胞毒性,方法非常便捷。

 

  1. 支 原 体 污 染 预 防

俗话说,预防胜于治疗,所以操作的器材与环境消毒也至关重要:

  1. 超净工作台预防

Pharmacidal成分为四苯甲基化合物,不含汞,甲醛,苯酚或酒精。可生物降解,无毒,无刺激,对一般的工作台和器材表面没有任何损伤。不需稀释,每次使用超净工作台前或每天喷洒一次台面,二氧化碳培养箱每两周一次喷洒消毒,喷洒后让其自然风干,无需擦拭。

  1. 水盘为维持培养箱湿度所必需,但也成为潜在的污染源

BI Aquaguard-1 (货号: 01-867-1B 100ml, 稀释100倍使用) 消毒水盘效果非常好,而且不会腐蚀不锈钢,无毒,不挥发。

  1. 其他实验室的水浴环境也容易造成污染

BIAquaguard-2 (货号: 01-916-1E 50ml, 稀释500倍使用),可以有效消毒任何形式的水浴环境。

  

Anyway

科研路漫漫,

支原体君常相伴,

还是要做好预防和及时地检测,

给细胞安全的成长环境