文献解读

RayBiotech抗体芯片在肝癌研究中的应用

时间:2015-05-19 作者:技术部 来源:本站 浏览:2481


肝癌血清标志物筛选


杂志名称:  Cancer Letters

文献题目:Heat shock protein gp96 decreases p53 stability by regulating Mdm2 E3 ligase activity in liver cancer

本实验所用产品:RayBiotech人AAH-APO-1-2抗体芯片

(43个凋亡细胞因子抗体芯片

实验样品:细胞裂解液

研究背景:

    肝癌的发生、肿瘤复发、对化疗放疗的抵抗都与肝癌细胞抵抗凋亡作用息息相关。本文揭示了热休克蛋白gp96在调节肝癌肿瘤细胞的生长和凋亡的潜在作用。筛查gp96基因敲除肝癌细胞中凋亡相关蛋白,发现p53有明显变化,过表达或者敲除gp96的实验都证明gp96可以降低p53蛋白的表达水平,且gp96调控细胞凋亡依赖于p53。进一步的实验证明gp96与p53和Mdm2的相互作用促进了Mdm2介导的p53的范素化和降解。并且,干扰gp96诱导了肝癌细胞的凋亡抑制肿瘤生长。本文阐明一个潜在的机制gp96通过增加MDM2的E3连接酶活性促进p53降解,为肝癌提供新的治疗策略。

研究思路

实验方法

1.1 样品准备

  两个肝癌细胞系(SK-Hep-1和 HepG2);

  正常肝细胞系(L02);

  基因敲除得到稳定的gp96 knock-down细胞系
1.2 RayBiotech凋亡抗体芯片检测gp96基因敲除后肝癌细胞系的凋亡蛋白表达差异;

1.3 细胞凋亡、细胞周期和细胞增殖实验;

1.4 免疫共沉淀检测相互作用蛋白;

1.5 体外P53蛋白范素化检测;
1.6 鼠肿瘤移植实验; 

2 结果

2.1 Gp96抑制细胞凋亡以及降低肝癌细胞p53的表达

   

  

2 .2 RayBiotech芯片筛查肝癌细胞gp96基因敲除后凋亡相关蛋白变化

 

采用Ray Biotech AAH-APO-1的凋亡抗体芯片筛查gp96基因敲除和未敲除肝癌细胞凋亡相关蛋白表达差异,筛选到15个蛋白Caspase 3, DR6,bad,bax,IGFBP-5,IGFBP-6, IGF1-sR, HSP27,p21,p53,bcl2,bcl-w,CD40L, TRAILR-1,TRAILR-2在基因敲除细胞中明显上调,Fold Change 大于1.5倍。  用WB验证得到一致结果。

 

  

  

 2.3  gp96调控细胞凋亡依赖于p53


 

2.4 免疫共沉淀实验证明gp96与p53和Mdm2有相互作用

2.5 小鼠肿瘤移植实验证明gp96促进肿瘤体内生长

 

  


 

本文使用的RayBiotech AAH-APO-1 凋亡抗体芯片

 

bad

bax

bcl-2

bcl-w

BID

BIM

Caspase-3

Caspase-8

CD40
(TNFRSF5)

CD40 Ligand
(TNFSF5)

cIAP-2

Cytochrome C

DR6
(TNFRSF21)

Fas
(TNFRSF6/Apo-1)

Fas Ligand
(TNFSF6)

HSP27

HSP60

HSP70

HTRA2

IGF-1

IGF-2

IGFBP-1

IGFBP-2

IGFBP-3

IGFBP-4

IGFBP-5

IGFBP-6

IGF-1 R

livin

p21

p27

p53

SMAC

Survivin
(BIRC5)

TNF RI
(TNFRSF1A)

TNF RII
(TNFRSF1B)

TNF alpha

TNF beta
(TNFSF1B)

TRAIL R1
(TNFRSF10A/DR4)

TRAIL R2
(TNFRSF10B/DR5)

TRAIL R3
(TNFRSF10C)

TRAIL R4
(TNFRSF10D)

XIAP