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MACS磁珠分选基础(一)MACS磁珠及分选策略

时间:2015-10-18 作者:市场部 来源:本站 浏览:2809





MACS磁珠及MACS分选策略

1、默天旎的微珠由什么组成?

微珠由多聚糖和氧化铁组成,可以生物降解,无毒,对细胞无损伤。


2、用MACS微珠分选出来的细胞进行后续实验时需不需要将磁珠解离掉?

无需解离磁珠,可以直接进行后续实验:如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、甚至回输给人或者动物。

  • 微珠小:仅50nm,不会影响细胞的光散射特性;

  • 微珠少:磁性标记只占用20-30%的表位,不影响分选后的细胞再进行荧光抗体标记。MACS微珠小,不影响细胞的散射特性;

  • 微珠无毒、可生物降解。

2014年1月默天旎的CD34微珠与CliniMACS系统已经获得美国FDA认证,分选出来的造血干细胞可以用于治疗人急性白血病,足以说明默天旎MACS微珠对人体是没有毒性的。





3、做MACS磁分选时,磁珠与细胞结合的最佳条件是怎样的?

磁珠与细胞结合最重要的三个因素是:时间、温度和磁珠浓度。

  • 孵育时间和温度:

大部分MACS微珠与细胞孵育的最佳时间为15min,而且,建议孵育过程在冰箱或4-8°C下进行。温度过高或孵育时间过长会引起非特异性标记,导致分选纯度下降;如果在冰上进行操作,建议将孵育时间延长,否则,磁珠与细胞不能充分结合,从而影响细胞得率或纯度。

当然,也会有一些磁珠的孵育,我们建议在室温或冰上操作,具体参见相关试剂说明书即可。

  • 磁珠浓度:

磁珠浓度对于其与细胞的结合也是非常重要的,建议您按照说明书进行:大部分磁珠要求1:5稀释,如10^7细胞重选于80ul分选缓冲液中,然后加20ul磁珠孵育。


4、MACS微珠有哪几种?

直标微珠、间标微珠和多选微珠。

  • 直标微珠:MACS微珠上耦联可以直接识别细胞表面分子的单抗,进而标记并捕获细胞。该方法简单、一步法标记、特异性好、纯度高。

  • 间标微珠:当没有直标微珠时可采用此策略。两步法标记:首先,用针对细胞表面分子的一抗来标记细胞;然后选择针对该一抗的磁珠(如抗荧光素或Ig结构的磁珠)进行二次标记,即可间接标记细胞。

间标磁珠有抗荧光素(FITC、PE、APC等)磁珠、抗生物素磁珠、链酶亲和素磁珠及Ig磁珠。


5、MACS分选策略有哪些?

MACS分选策略包括:阳性分选、去除分选、多参数分选、多重分选。

  • 阳性分选:目的细胞直接与磁珠结合而被捕获,因此,阳性分选到的细胞表面带有磁珠。

  • 去除分选:磁珠结合并捕获目的细胞以外的细胞,而目的细胞不接触磁珠。

  • 多参数分选:即根据细胞表面的两种表面标记来分选目的细胞,如CD4+CD25+调节性T细胞的分选。多参数分选可以选用多选微珠,也可以结合阳性分选和去除分选来完成。

  • 多重分选:正常情况下,用MACS技术分选到的细胞是不需要将微珠解离掉的,但是,我们也专门设计了很多可以解离的微珠,可以用于多参数分选,第一步阳性分选后,将磁珠从抗体上解离下来,这样阳性分选到的细胞上就不带磁珠了,然后可以进行第二次磁性标记和阳性分选。因此,可以通过两次阳性分选得到两种Marker阳性的细胞群。