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MACS磁珠分选基础(二)MACS分选柱

时间:2015-10-21 作者:市场部 来源:本站 浏览:3456





1、为什么MACS磁珠分选要使用分选柱?


•磁珠可以更小:美天旎磁珠直径只有50nm,普通真核细胞直径一般大于10um,结合在细胞上的磁珠大小完全可以忽略不计,因此:1、携带的磁珠不影响细胞大小——可以直接上流式检测,不影响FSC数据收集;2、细胞功能不受影响——分选过程中,磁珠的结合不会引起细胞的活化及其它生理状态的改变,可以保持细胞的原始生理和功能状态,尤其在Naive免疫细胞的分选中尤为重要。

•抗原表位的占据更少:因为磁场可以被分选柱放大1000-10000倍,所以不需要太多的磁珠结合即可分离不同细胞。约20%-30%的抗原表位被偶联了磁珠的抗体结合即可将细胞滞留在磁场中,这就为后续实验预留了足够的抗原表位,因此,对于表达水平不低的抗原来说,MACS磁珠分选后的细胞可以直接进行相关荧光抗体标记,进而进行流式检测。

•细胞活力更好:通过分选柱引起的间接磁场放大,使得细胞在磁场中所承受的直接压力小,让细胞受力均匀;同时,通过分选柱放大的磁场可以瞬时变大、离开磁场后磁力又瞬间消失,这些都保证了细胞所受机械力小,损伤小,得到的细胞活力高。

•细胞纯度更高:通过去除分选柱,可以更好的进行去除分选,提高目的细胞的纯度。


2、是不是所有细胞都要从分选柱上重新获取?

不是。

若使用阳性分选策略,目的细胞是磁性标记的,在分选器和分选柱产生的磁场中滞留后,当分选柱移出分选器,磁场瞬间消失,此时用活塞用力将分选柱中滞留的细胞推出,从而收集到目的细胞;

反之,若使用去除分选策略,此时目的细胞是非磁性标记的,可直接从洗脱液中获得。


3、MACS分选柱有哪几种,如何选择合适的分选柱?

MACS分选柱根据其细胞容量、用途可以分为几种:

MS、LS、LD、大细胞分选柱、全血分选柱、autoMACS分选柱以及用于生物大分子分离的u柱等,选择分选柱时要根据您的实验目的、实验策略和注重的实验效果来取舍。




4、MACS分选柱能否重复使用?

普通的MACS分选柱不建议重复使用,但autoMACS分选柱分可以重复使用。


  • 重复使用不能保证无菌,MACS分选柱都是独立、无菌包装的,保证分选下来的细胞无污染;

  • 分选柱内填充了经亲水包被层处理的铁珠,如果通过浸泡、洗涤等过程重复使用,那么,铁珠表面得亲水层被破坏,裸露的铁珠与细胞接触会对流经的细胞产生损失,影响细胞活力和分选效果。


5、那为什么autoMACS分选柱可以重复使用呢?

autoMACS分选柱可以在两周之内使用,且最多用100次。

autoMACS分选柱一旦安装到全自动分选仪上,须保存在液体中,防止分选柱中的填充基质被氧化无法使用。

每次使用后应该按照推荐程序进行冲洗和消毒,以便更好的保存和下一次使用。


6、全血分选柱与普通分选柱有何不同?

  • 全血分选柱有两层特殊的基质,非磁性层和磁性层;普通细胞分选柱中填充的是均一的亲水包被层处理的铁珠;

  • 全血分选柱柱容量为15ml的全血;

  • 全血分选柱可用于直接从全血中分选细胞,无需进行红细胞裂解或者密度梯度离心的过程,无需先制备PBMC。