细胞磁分选方案大全
本文以美天旎MACS磁珠为例,汇总细胞磁分选的各种方案。
MACS磁珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒,用于在高强度磁场、梯度磁场中对细胞磁性分离。
磁珠仅50nm,是细胞体积的百万分之一,标记少,仅占细胞表位20%-30%,最大程度避免细胞活化,同时兼容下游流式分析。
MACS磁珠主要有3种:
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直标磁珠:磁珠通过偶联的抗体,直接磁性标记细胞;
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间标磁珠:3大类,抗荧光素磁珠、抗生物素磁珠、抗免疫球蛋白磁珠
间标磁珠几乎可以分选任意物种的任意细胞类型。
抗荧光素磁珠 |
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目录号 |
名称 |
总细胞 |
130-097-054 |
Anti-PE Microbeads, lyophilized(干粉) 推荐! |
1 X 109 |
130-048-801 |
Anti-PE Microbeads |
1 X 109 |
130-097-143 |
Anti-APC Microbeads, lyophilized(干粉) |
1 X 109 |
130-090-855 |
Anti-APC Microbeads |
1 X 109 |
130-097-050 |
Anti-FITC Microbeads, lyophilized(干粉) |
2 X 109 |
130-048-701 |
Anti-FITC Microbeads |
2 X 109 |
130-091-395 |
Anti-Cy5/Anti-Alexa Fluor 647 Microbeads |
1 X 109 |
130-091-652 |
Anti-Cy7 Microbeads |
1 X 109 |
抗生物素磁珠和链霉亲和素磁珠 |
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目录号 |
名称 |
总细胞 |
130-097-046 |
Anti-Biotin Microbeads, lyophilized(干粉) |
1 X 109 |
130-090-485 |
Anti-Biotin Microbeads |
1 X 109 |
130-048-102 |
Streptavidin MicroBeads |
1 X 109 |
抗免疫球蛋白磁珠 |
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目录号 |
名称 |
总细胞 |
130-048-401 |
Anti-Mouse IgG(H+L)-Microbeads |
1 X 109 |
130-047-101 |
Anti-Mouse IgG1- Microbeads |
1 X 109 |
130-047-201 |
Anti-Mouse IgG2a+b- Microbeads |
1 X 109 |
130-047-301 |
Anti-Mouse IgM Microbeads |
1 X 109 |
130-047-501 |
Anti-Rat IgG(H+L) Microbeads |
1 X 109 |
130-048-602 |
Anti-Rabbit IgG(H+L)- Microbeads |
5 X 109 |
130-047-401 |
Anti-Rat Kappa Microbeads |
1 X 109 |
多选磁珠:磁珠通过偶联的抗体直接磁性标记,又可通过酶催化反应,从抗体解离磁珠。
磁分选方案汇总:
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磁珠直接标记目的细胞,过分选柱,洗脱收集分选柱中的磁性标记目的细胞
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磁珠直接标记非目的细胞,过分选柱,收集流下来的没有被标记的目的细胞
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利用一抗和间标磁珠,标记多种非目的细胞,过分选柱,收集流下来的untouched目的细胞
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如目的细胞和非目的细胞有同一种marker, 一次阳选不能搞定,需要先特异标记非目的细胞(非目的细胞特有的marker),过柱去除磁标记的非目的细胞,收集留下来的含有目的细胞的溶液,再用目的细胞常见marker标记目的细胞,过分选柱,洗脱收集目的细胞。
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利用基因工程重组抗体结合间标磁珠,形成多聚复合体,对细胞具有特异性高亲和力,从而实现对目的细胞表面磁性标记,过分选柱,洗脱,收集磁性标记的目的细胞,再用REAlease Bead Release Reagent去除细胞表面磁珠。如果需要untouched细胞,可以用REAlease Release Reagent去除细胞表面标记,后续如有需要,可进一步做标记分选。
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多参数细胞分选,基于不同的细胞marker 进行的2步依次阳选。首先第一次磁性标记阳选后,过柱洗脱收集阳选的磁性标记细胞,用 MultiSort Release Reagent去除第一次的磁性标记,这样目的细胞又可以二次用磁珠直接标记,进行二次阳选
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