竟然还有这样的凋亡试剂盒?!
流式检测凋亡时,总是遇到FITC荧光不够强,和PI调补偿很麻烦。或者是样本有GFP自发荧光,FITC和PE都不能用。
其实,Annexin V也可以选择不需要调补偿的荧光素呢!比较常用的就是Annexin V-Alexa Fluor®647 (Ex: 652nm, Em: 668nm;检测通道与APC相同),而且再也不怕自发荧光啦~
让我们一起看看Annexin V在流式实验中的作用原理和存在的优势吧!
细胞凋亡(apoptosis)指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。
凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性,对PS有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此,可以采用Annexin V与PI双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。
Ø Alexa Fluor 系列荧光稳定性更高,荧光强度更强,FITC荧光强度相对较低,稳定性较差;
Ø AF647与PI基本不需要调节补偿,所以数据分析更加简单,而FITC/AF488与PI都需要调节补偿
Ø 现货充足,性价比高
那实验过程中,我们还会遇到哪些常见的问题呢?
1.为什么不能用胰酶+EDTA消化后的细胞做细胞凋亡检测?
● Annexin V是该依赖性的磷脂结合蛋白,而EDTA是钙离子螯合剂
● 胰酶+EDTA消化能力过强,会造成细胞死亡,影响结果的真实性
2.检测不到凋亡率如何判断是操作问题还是样本确实没发生凋亡?
● 推荐可以设置阳性对照:喜树碱、双氧水或55℃水 浴 30s-1min(时间可能需要调整)
3.为什么PI阳性率很高?
● 贴壁细胞在消化、吹打和离心的时候可能会存在机械损伤,尤其是较难消化的细胞。
4.培养的细胞细胞上清是否需要保留?
● 需要
学习了这么多,发现Annexin V好用到爆了吧
其实福麦斯还有以下这些关联产品,一样好用
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