二抗，你真的懂它吗？

二抗，你真的懂它吗？

一、简介

二抗可用来检测细胞或组织样品中的蛋白质表达。二抗与抗原特异性的一抗结合使用，可实现对目标蛋白内高度特异性的氨基酸进行检测。二抗对一抗指定区域或多个区域的特异性，允许多个二抗与单个一抗结合，放大信号并提高检测灵敏度。

二、抗体的结构

抗体是Y字形的分子，由三个大小相同的区域组成。富有弹性的铰链区将抗体柄部（Fc）与抗体臂（Fab）相连。两条臂可用于抗原的结合，而柄部决定了抗体的型别和功能特性。每条臂由一条重链和一条轻链组成。此外，这些重链和轻链分别由一个可变区（V_L或V_H和一个恒定区（C_L或C_H）组成。不同抗体之间重链和轻链的可变区（V）不同，这赋予了抗体识别其同源抗原的特异性。Fc柄部的变化很小，但它对效应分子和细胞的相互作用很重要。

三、二抗的常见缩写

什么是二抗？

二抗是靶向结合免疫球蛋白（抗体）分子的抗体。在免疫检测（间接检测）中，在理想状态下，二抗特异性地与特定种属和类别（同型）的一抗结合。请注意，二抗不与目标蛋白的表位直接结合，也不具有抗原表位特异性（这其实是由一抗决定的）。带有标记的二抗决定了检测方法。

二抗是如何产生的？

二抗是在动物中生产并收集的，具体方法是用另一种动物的抗体来免疫动物。用于免疫的抗体的特性（如种属、亚类、片段等）决定了二抗的特异性。例如，兔抗大鼠lgG2b（H+L）二抗是用大鼠lgG2b免疫球蛋白分子的重链和轻链来免疫兔子而生产的。

二抗有哪些优势？

由于多个二抗可以与单个一抗结合（信号放大），二抗提高了检测的灵敏度。

直接检测：带有单个偶联物的抗体靶向结合感兴趣的目标

间接检测：使用不带偶联物的一抗以及带有偶联物的二抗

四、二抗的宿主种属

应该如何选择二抗的宿主？

二抗应直接针对一抗种属，而不是来自于与一抗相同的种属。例如，小鼠一抗需要一个抗小鼠的二抗，而该二抗要产自小鼠以外的其它种属（如兔、山羊、大鼠、驴等）。

五、二抗的特异性

六、二抗的偶联物

应当选哪种标记？

标记的选择通常取决于应用。需要荧光检测的分析（如流式细胞分析、免疫细胞化学、免疫荧光等）需要与荧光染料偶联的二抗。在设计每个实验时，应考虑每种荧光染料的激发和发射光谱。常用的荧光染料包括FITC、PE、APC、DyLight™,AlexaFluor™或Atto染料。酶学检测需要与辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）或生物素偶联的二抗。亲和素及链霉亲和素能够与生物素结合并形成复合物，实现不依赖于二抗宿主种属的信号放大。HRP比AP更为经济和稳定，因此HRP在化学发光检测系统中更常用。不过，AP的灵敏度高于HRP，这使其在显色检测中更常用。