细胞因子风暴相关产品介绍
细胞因子释放综合征（CRS；又称为细胞因子风暴）是一种可能危及生命的免疫疗法不良反应，具体是指活化的淋巴细胞或骨髓细胞释放超生理水平的炎性细胞因子。目前已经在那些接受单克隆或双特异性抗体输注的患者以及那些接受过继T细胞疗法的患者身上观察到CRS1。随着研究人员竞相开发新的免疫疗法或组合疗法，预测CRS等不良反应至关重要。Bio-Techne旗下的多个品牌为测定细胞因子分泌提供了许多工具。
测定细胞因子表达的定量检测
上清液或裂解液中的细胞因子可利用Proteome Profiler™ Antibody Array同时测定。这是一种基于膜的抗体芯片，能够平行测定分泌的人细胞因子和趋化因子的相对水平。它不需要特殊的仪器，也不需要多次Western blot实验。抗体芯片试剂盒包含了缓冲液、检测抗体以及点样了高质量捕获抗体的膜，每个抗体重复点样两次。芯片利用化学发光或红外抗体偶联物进行检测。因此，可通过与传统的Western blot相同的方式来评估膜上细胞因子水平的变化。
在这个例子中，THP-1人急性单核细胞白血病细胞未经过处理，或用1ug/mL的recombinant human IFN-γ（R&D Systems®，货号285-IF）处理16小时，再用1ug/mL脂多糖（LPS）处理8小时，接着用Proteome Profiler Human XL Cytokine Array Kit分析（图1）。IFN-γ和LPS的处理导致IFN-γ、IL-6、IL-8、IP-10、I-TAC、MCP-1、MIG和MIP-1-α/MIP-1-β的表达增加。
图1. IFN-γ和LPS处理导致THP-1细胞的细胞因子表达升高。THP-1人急性单核细胞白血病细胞未经过处理，或用1ug/mL的recombinant human IFN-γ处理16小时，再用1ug/mL脂多糖（LPS）处理8小时。
表1.适用于细胞因子分析的Proteome Profiler Antibody Array
Bio-Techne还提供Luminex® Assay和Luminex High-Performance Assays，能够同时检测和定量复杂样品类型中的多个目标分析物。对于每个目标分析物，结果具有可重复性。只需要少量样品，经济高效，并且让研究人员能够在更短的时间内收集更多数据。
Luminex Assay 的特点：
广泛的选择、灵活、出色的准确性、订购方便
我们通过比较Luminex assay与一些竞争对手产品的稀释线性来评估准确性（图2）。准确的检测在图中接近100%回收率的位置产生了一条直线，因为当样品稀释时，待测定的分析物仍然被准确检测。如果当样品稀释时，直线远远偏离100%，这表明该检测不能准确测定感兴趣的分析物。
我们目前还提供600多种完整的即用型Quantikine® ELISA Kit和1000多种DuoSet® ELISA开发系统及20多种Valukine™ ELISA Kit，适用于多个不同的分析物和物种，包括人、小鼠、大鼠、犬、灵长类和猪。选择能够带来可信赖结果的优质试剂，是科学研究中最关键的一点。R&D systems提供多种ELISA选择，让您可根据需求测定细胞因子（表2）。
图2.已知浓度的IL-2被加标到血清或血浆中，在三倍连续稀释后由每种XL Cytokine Discovery Luminex Performance Assay和每个供应商的Luminex Assay进行分析。根据标准曲线倒推出样品值，计算出未稀释样品的浓度，并以回收率%与样品稀释度表示。
表2.R&D Systems®测定细胞因子的ELISA选择。
Ella的Simple Plex检测特别适合检测珍贵的人类样品和癌细胞系中的细胞因子。Simple Plex检测能够测定少量样品中浓度低于pg/mL水平的目标，且变异系数低至个位数。Genentech的科学家曾研究了Ella平台上的Simple Plex检测细胞因子（包括IL-6、IL-8和TNF-α）的能力，他们的结论是该平台能够以高灵敏度检测低水平的内源分析物，并且Simple Plex检测可用于免疫疗法的作用机制评估以及候选生物标志物的重点临床验证2。
Paulomi Aldo等人研究了Simple Plex检测和定量人和小鼠样品中细胞因子的能力，并将结果与传统的免疫检测（如ELISA和Luminex）进行比较3。他们的结论是“就所需样品量、高灵敏度和动态范围、变异系数和重复性而言，Simple Plex与这些传统的分析板多重免疫检测方法相比表现岀明显的优势”。表3概括了Ella免疫检测平台上现有的CRS标志物。
表3.现有的细胞因子释放综合征标志物的Simple Plex检测指标
RNAscope在RNA水平可靠地观察小型分泌分子，如细胞因子和趋化因子，为鉴定这些小分泌信号的潜在细胞来源带来了额外的优势。检测细胞因子/趋化因子与细胞谱系关键标志物的共表达模式有助于了解各种类型的免疫细胞之间的空间关系和相互作用以及它们的状态信息。
通过IFNγ mRNA在单个CD8+（IHC）细胞中的表达，胶质母细胞瘤的福尔马林固定石蜡包埋样品就说明了这一点（图3）。另外一些例子，如IL10/CD163、IL12/CD68（胶质母细胞瘤）以及CXCL10/CD68，CCL22/CD163（卵巢癌）显示在图4中。此外，IL6和IL6ST作为细胞因子受体复合物的一部分，在同一组织切片中也利用RNAscope®检测到。
图3.利用RNAscope LS Multiplex Fluorescent ISH assay对IFNγ进行原位检测，并通过IHC检测CD8细胞谱系标志物。IFNγ mRNA（红色）、CD4 mRNA（绿色）和FOXP3 mRNA（黄色）与CD8抗体（白色）重叠（A）。IFNγ mRNA（B）和CD8蛋白（C）的单通道图像。箭头指出了同时表达IFNγ和CD8的单细胞。
图4.利用RNAscope 2.5 HD Duplex Assay对胶质母细胞瘤和卵巢癌FFPE组织样品的肿瘤微环境中的细胞因子进行原位检测。结合细胞谱系标志物CD163和CD68以及IL6ST（绿色），在胶质母细胞瘤中检测到白细胞介素IL6、IL10和IL12（红色）（A）；以及在卵巢癌肿瘤中检测到趋化因子CXCL10和CCL22（红色）（B）。
参考文献：
1) Lee, DW et al., Current concepts in the diagnosis and management of cytokine release syndrome, 2014; Blood, 124:188-95.
2) Gupta, V, et al., Bioanalytical qualification of clinical biomarker assays in plasma using a novel multi-analyte Simple PIex™ platform, 2016; Bioanalysis, 8: 2415-28.
3) Aldo, P, et al., Simple Plex™: a novel multi-analyte, automated microfluidic immunoassay platform for the detection of human and mouse cytokines and chemokines, 2016; American Journal of Reproductive Immunology, 75: 678-93.
