Milliplex磁珠分选操作注意事项

如果是定量试剂盒，请参考各自试剂盒说明书最后部分的Assay Sensitivities表格。我们一般会用MinDC±2SD来表示最低检测浓度。如果是定性试剂盒（例如信号通路检测相关产品），说明书中一般有数据显示多少微克细胞裂解液对应的MFI的图片。

1.产品保存温度：2-8℃，有效期见试剂标签；

2. 分选用Buffer：PBS, pH 7.2, 0.5% bovine serum albumin (BSA), and 2 mM EDTA或130-091-221 autoMACS Running Buffer；

3. 如果分选的细胞后续需要培养，则整个操作应当在超净台或生物安全柜中完成；

4. 在磁珠分选的整个过程中，尽可能操作迅速，并使细胞维持2-8℃状态（离心时也同样），使用预冷试剂，这样可以避免抗体在细胞表面形成聚集以及非特异性细胞染色；

5. 磁珠分选前需检测细胞活性，活性大于90％才能进行后续分选；

6. 抗体包被磁珠对死细胞有非特异性结合，因而分选前应当去除死细胞（ 130-090-101 Dead Cell Removal Kit）；

7. 磁珠分选前需细胞计数，一般情况下，磁性标记量适用于起始细胞量为10e7细胞。低于10e7按照10e7操作，超过该数目，试剂用量均按比例增加（缓冲液用量视情况而定，可适当增加，即细胞可以充分吹散即可，不需要按比例增加）；

8. 磁性分选前得到单细胞悬液很重要，过MACS SmartStrainer 30μm滤器可以去除细胞团块；

9. 分选髓系来源细胞（例如巨噬细胞、单核细胞等）时，需先用FcR Blocking封闭掉细胞表面FcR，防止磁珠抗体的非特异性结合；

10. 在弃去上清后，可能会有一部分上清没有被完全去除仍然留在试管中，这部分上清体积我们称为死体积，加缓冲液时需考虑到这部分死体积适当减少缓冲液剂量；

11. 在磁珠和抗体的孵育过程中，可每隔五分钟用手指轻弹试管，使细胞和磁珠抗体充分混合，不能剧烈震荡；

12. 孵育温度一般推荐4℃，冰上操作需要增加孵育时间；如细胞活性不高，也可以适当增加孵育时间，但是增加孵育时间也会导致非特异性结合；

13. 如细胞易活化，可以适当降低离心速度以及时间；

14. 过柱之前需先润洗分选柱，注意不能在柱身出现气泡；

15. 细胞悬液加入分选柱时，应将滴管伸至底壁后加入，避免将细胞悬液沿管壁流入，使管壁残流未分选细胞，以致后续洗柱过程中，因疏忽未被洗下，最后导致得率和纯度不高；洗柱时，应在前次液体充分流尽后，再加洗液；

16. 如目的细胞占总细胞数比例较低或细胞纯度不高，可选择过两次分选柱；

17. 分选柱的使用请参考说明书，如说明书要求用MS柱尽量不要使用LS柱；

18. 分选柱只能单次使用，二次使用会降低分选效率且易导致细胞污染。