流式实验的对照

空白对照，其实可以简单理解为未染色对照，设置空白对照用以区分细胞的自发荧光和特异性荧光。

在流式细胞术中，染色的背景水平是一个重要的影响因素，同种型对照的作用是消除由于抗体非特异性结合到细胞表面的Fc受体及静电结合而产生的背景染色。一般选择相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记但由未免疫动物血清纯化而来的抗体，比如抗鼠的CD11b PE标记的抗体，成份是Rat IgG2b, κ。那么相应的同型对照应该是PE标记的Rat IgG2b, κ Isotype Control。此外，需要注意的是，有些抗体的浓度和同型对照抗体的浓度不一致，使用时，应当以相同剂量为准。

荧光减一对照(Fluorescence Minus One，FMO)是指实验设计里的所有荧光减去一个荧光后染色的细胞样本。多色流式实验中，检测指标越多，越容易发生荧光溢漏，这非常影响设门的准确性，尤其是表达水平极低、需要从较大比例的阴性群体中识别阳性信号时，为了排除干扰信号，确定设门的准确性，FMO便显得尤其重要。

当进行多色流式实验时，单染色样品对于确定补偿水平至关重要。 单独染色将显示不同荧光团之间光谱重叠的水平，并允许您去除或补偿此重叠。当使用单个染色样品进行补偿时，要考虑的重要事项是荧光基团需要相同，其亮度与实验中使用的相似，需要收集足够的事件才能具有统计学意义。