流式的补偿调节

在进行流式细胞术多色分析时，待测细胞通常标记两种或两种以上的荧光素。荧光素被激光激发后发出不同波长的荧光，理论上每一种荧光通过选择恰当的滤光片可被相应的检测器检测到，而不受其他荧光的干扰。但目前这些荧光染料都具有宽发射谱性质，尽管它们的发射峰各不相同，但发射谱范围有一定的重叠，也就是说，相邻的检测器会检测到彼此的荧光信号，例如FITC通道会检测到少量的PE光谱，而PE通道会检测到较多的FITC光谱。这样就影响了检测结果的准确性，因此，多色分析时必须进行光谱重叠的校正，也就是我们常说的补偿调节。

荧光通道之间补偿的大小主要受仪器的型号、荧光素偶联抗体和细胞三个因素的影响。

不同型号的仪器使用滤光片分离荧光的方法不同，而且各个荧光通道虽然接收的荧光波长范围相似，但是也有所差别。所以，荧光通道之间的补偿并没有一个固定的值，不同型号的流式细胞仪具有不同的补偿值大小。

第二个影响因素是荧光素偶联抗体，尤其是荧光素，这也是需要调节补偿的原因，不同的荧光素之间需要调节的补偿不同。另外，如果标记时荧光素偶联抗体抗体的浓度过高，其荧光波长的范围可能会扩大许多，从而改变相应的补偿值。

细胞也是影响补偿大小的一个因素，尤其是当细胞的理化性质相差较大时，各通道的补偿值也可能会发生变化。

以FITC-抗CD8抗体和PE-抗CD4抗体为例。

2号样品只标记了FITC-抗CD8抗体，如下图所示，设置“FL2-FL1”（PE-FITC）补偿，使 FL2通道不接收FITC的信号，原则是使FITC阴性和FITC阳性两群细胞处于同一水平线（即“横平竖直”）

同样，3号样品只标记了PE-抗CD4抗体，如下图所示，设置“FL1-FL2”（FITC-PE）补偿，使 FL1通道不接收PE的信号。

此时补偿已调节好，F1通道只接收FITC荧光信号，F2通道只接收PE荧光信号。