外泌体之鉴定

任何情况下，好的样本是实验成功的关键。前面通过各种方法辛辛苦苦制备得到的外泌体，在开展后续实验之前，必须加以鉴定，来判断提取效果，包括是否是外泌体？纯度？量？等多种参数；这么复杂，具体该怎么鉴定呢？

外泌体的鉴定

1.外泌体NTA（纳米颗粒追踪分析）鉴定服务

NTA（Nanoparticle Tracking Analysis）纳米颗粒跟踪分析技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一，原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。

送样要求：

· 寄送需保持低温运输，短途可加冰袋运输，长途推荐使用干冰运输；

· 该仪器检测上下限为105-1010，最佳检测浓度为107，请提供不少于50μl的样本，且避免过度稀释；

· 样本寄送须随附委托单。

我们提供：

· 颗粒浓度

· 粒径大小

· 粒径浓度分布

流式鉴定

德国美天旎的这款鉴定试剂盒，可以鉴定样本中不同表型外泌体所占的比例，为后续进一步的研究提供参考依据。

试剂盒可检测外泌体37个表面抗原和2个同型对照。首先，外泌体捕获磁珠捕获到样本中的外泌体，检测抗体来识别并且结合磁珠-外泌体复合物，最后通过流式细胞仪进行检测。

参考文献：

1. Théry, C. et al. (2006) Curr. Protoc. Cell Biol. 3.22.1–3.22.29. 

2. Koliha, N. et al. (2016) J. Extracell. Vesicles 5: 29975. doi: 10.3402/

jev.v5.29975.

蛋白分析与鉴定

（1）SDS-PAGE：通过SDS-PAGE电泳可以分析得到的Exosome中蛋白的含量及种类。

（2）Western-Blot：通过Western-Blot可以检测Exosome中特定蛋白的表达情况。

重要的marker：

· Alix：MVB形成蛋白；

· Annexin V：膜转运；

· CD54/ICAM-1：保内细胞粘附分子；

· CD9：对应抗原是四次跨膜蛋白，对外泌体与受体细胞融合有重要作用；

· Flotillin：脂膜阀（lipid rafts)膜蛋白，脂阀定位和移动功能，参与内吞作用和自噬途径；

· HSP70：一种伴娘蛋白（chaperone)，维持细胞稳态，防止错误折叠。

CST（cell signal technology）公司提供一款外泌体鉴定试剂盒（#74220T），内含多种外泌体特异性抗体，经过了WB以及其他实验验证，保证抗体的特异性和灵敏度，有较高的文献引用。

参考文献：

Lei Wang.et al.(2018) Molecular Therapy,26(4),1032-1039.