外泌体之提取

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-100nm)。1986年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关外泌体的分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制，也在研究中。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

外泌体的提取和制备

超速离心法（差速离心）

超速离心法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超速离心法因操作简单，获得的囊泡数量较多，但过程比较费时，且回收率不稳定（与转子类型有关），纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。

超滤离心法（Ultrafiltration）

由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体，大于一般蛋白质，利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离，便可获得外泌体。超滤离心法简单高效，且不影响外泌体的生物活性，是提取细胞外泌体的一种新方法。

· 对于30ml以上的含血清样本，最佳选择：

先用500KDa的Amicon® stirred cell（超滤杯）预处理，再用15ml、3KDa的Amicon® Ultra超滤管进一步浓缩。

· 对于小体积、含血清样本，可以用100KDa的Amicon® Pro来进行浓缩。

· 对于不含血清、体积在15ml左右的样本，最好的选择是3KDa、15ml的Amicon® Ultra超滤管。

订购信息：

色谱法——Exo-spin外泌体纯化试剂盒

产品特色：

· 高产量高纯度

外泌体产物中蛋白的rRNA污染极低；无沉淀试剂残留

· 不需高速离心

纯化流程温和，依样本不同耗时约30分钟-3小时

每次纯化结果皆能高度吻合

· 操作简便并且产物纯度高

分离出的外泌体完好无缺，能用于功能研究、RNA及蛋白分析。

热卖产品：

（1）EX01-8，适用于细胞培养上清、尿液、唾液、血清、血浆等多种样本提取，为通用型；

（2）EX02-8，适用于血清、血浆、脑脊液类样本提取；

（3）EX04-5，中型尺寸排除色谱柱，上样量更高（通用型）。

与其他方法比较：

化学沉淀法——EXO-Prep系列

产品特色：

· 操作简单、无需超速离心

一步离心，实验仅需1小时；

· 适用多种生物样本

血清/血浆、细胞培养上清、尿液等；

· 所需样本体积小

少至100UL体积。

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免疫法

磁珠免疫法

外泌体表面有其特异性标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以广泛普及。

德国美天旎针对外泌体的不同标记物，研发出三款磁珠，分别是CD9、CD63、CD81磁珠。在外泌体指标明确的情况下，可以选择对应标记物的磁珠。如果是分选样本中总的外泌体，推荐美天旎的CD9、CD63、CD81混合型磁珠。

完成磁珠分选实验，需要搭配相应的分选架和u分选器。每一款外泌体磁珠，美天旎都有相应完整的分选起始套装（Starting Kit），让外泌体分选一步到位。

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