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本期内容

人/小鼠Th细胞和Treg细胞整体解决方案


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背景


顾名思义,辅助性T细胞(Th)为免疫系统的其他细胞提供辅助功能,特别是抗原呈递细胞(APCs),如巨噬细胞、树突状细胞和B细胞,并对这些细胞的活化和成熟起到重要的作用。


CD4+ Th细胞有不同的亚群,包括Th1、Th2、Th17和调节性T细胞,每个亚群都由一组特定的细胞因子和转录因子活化,并以它们分泌的细胞因子和发挥的效应功能为特征。


功能


1

Th1细胞功能

Th1细胞的主要效应功能在于细胞介导免疫和炎症,包括活化其他免疫细胞如巨噬细胞、B细胞和CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的细胞溶解和其他效应功能。

Th1介导的其他免疫细胞活化的第一步是Th1细胞表面的CD40配体(CD40L)与巨噬细胞、B细胞和树突状细胞表面表达的CD40发生相互作用。

效应Th1细胞还分泌大量的IFNγ,除了进一步扩增Th1细胞群,还通过诱导200多个靶基因活化巨噬细胞的溶解细胞活性。

除了清除细胞内感染,Th1反应还在活化CD8+细胞毒性T淋巴细胞以靶定和杀伤肿瘤方面起着至关重要的作用,此外还可增强CTL存活和记忆。CD40还促进B细胞中的类别转换,生成IgG2a抗体。

2

Th2细胞功能

Th2细胞也被证明能诱导选择性活化(M2)巨噬细胞,其介导炎症阶段的消退并启动伤口愈合过程中的组织修复。

效应Th2细胞介导对寄生虫感染、毒液、某些细菌感染的免疫反应,并通过诱导选择性活化(M2)巨噬细胞来促进伤口愈合。

3

Th17细胞功能

Th17细胞因子在炎症和组织保护方面具有广泛的作用,尤其是粘膜免疫。

4

Treg细胞功能

Th17细胞因子在炎症和组织保护方面具有广泛的作用,尤其是粘膜免疫。

Treg调节性T细胞有许多不同的免疫抑制机制。细胞接触依赖性抑制由TIGIT、CD39、CD73和CD152 (CTLA-4)介导,也可以由颗粒酶A和B对靶细胞的细胞溶解介导。虽然Treg细胞在活化时不分泌IL-2,但它们可以分泌免疫调节细胞因子,如IL-10、转化生长因子β和IL-35。据报道,在微环境和其他代谢紊乱中消耗IL-2是Treg抑制免疫反应的机制。


Th细胞以及Treg细胞研究方案


1

样本为分离的Naive CD4+T

Th1/Th2/Th17/Treg均可由naive CD4+T细胞分化而来

naive CD4+T细胞可通过Naive CD4+ T Cell Isolation Kit获得(美天旎;130-104-453小鼠;130-094-131人)

2

样本为PBMC

用PBMC分离液从全血样本中分离PBMC,然后用PMA(佛波酯)和Ionomycin(离子霉素)刺激细胞(必须一同使用),并用Brefedlin A 或Monensin(莫能霉素)抑制细胞因子分泌,并同时使用FcR Blocking降低非特异性染色。


分化


从样品分离Naive CD4+T细胞,就可以通过使用抗CD3(eBioscience)和抗CD28(eBioscience)抗体以及重组蛋白IL2(Peprotech)交联共刺激TCR和CD28受体,实现T细胞活化和刺激。


流式检测抗体设门


设门抗体:CD3+、CD8-;CD4+;(CD4会被PMA导致内吞,导致CD4分群不清,建议用CD8-反设CD4+)


流式检测panel建议


Th1细胞鉴定:CD4、IL-2 or IFN-γ

Th2细胞鉴定:CD4、IL-4 or IL-10

Th17细胞鉴定:CD3、CD8、IL-17A或 CD3、CD4、IL-17A或CD3、CD4、IL-17A



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创建时间:2022-12-23 10:23