干货开讲 | 你想了解的细胞周期都在这!

细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全部过程。


细胞周期



细胞周期检测最常见的方法就是应用流式细胞仪进行周期检测了!其原理简单的来说就是:

细胞周期各时相的DNA含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI(碘化丙啶)可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。




细胞周期的检测步骤

小福也贴心的为大家准备好了

检测步骤



在细胞周期检测过程中

大家可能会遇到各种各样的问题

小福也给大家整理了最常见的9个注意事项

大家在实验的时候要注意哟!

注意事项



1

对照问题

不需要设置空白对照(不染色细胞),但需要根据实验自行设计阴性对照;

2

避光问题

染色过程中关闭灯光,核酸染料孵育时放置暗盒避光孵育;

3

固定液

常用固定液有甲醛、甲醇和乙醇。但甲醛可减少染料结合,因为它们可诱导染色质交联。甲醇高浓度会造成细胞成团,很难重悬成单细胞,影响固定效果。DNA在组蛋白里,乙醇是沉淀剂,是目前用于制备周期样品最好的固定剂。一定要用纯水配置70%乙醇,PBS有盐析出会对细胞造成物理性伤害;

4

固定时间

最少需要4小时,固定过夜;

5

操作轻柔

不可过度吹打,防止细胞碎片过多;

6

细胞接种密度适中

细胞密度过密导致细胞停止增殖分裂,细胞滞留在G0/G1期。可以先预实验,避免细胞密度过密;

7

样本上机

流式检测周期必须以低速检测细胞,因为低速可保证细胞之间的差异尽可能的小,获得更高的精确度;

8

流式上机获取足够的细胞

一般计数2~3万个细胞。细胞周期分析需要用某个数学模型拟合数据,这些模型对S期、G1、G2/M期进行了不同的假设性推算,因此,需要有足够多的数据供模型拟合。如果细胞比较少,建议减少离心次数。如果药物处理后细胞死亡过多,应该降低药物浓度;

9

注意排除粘连体细胞

粘连体细胞容易与G2/M期细胞混淆起来,增加假阳性结果。我们可以通过以下三个方式减少其干扰:制备好的单细胞悬液;注意固定操作并记得在上样前过滤标本;确保分析时使用H、W和A等参数来设门排除粘连体。



创建时间:2022-12-23 10:23