总结 | 细胞污染的解决方案和预防

凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。

上期我们着重介绍了细胞培养过程中的生物污染类型，本期我们就来细说一下污染后的解决方案和预防措施。

解决方案：

1. 丢弃所有已经污染的细胞和培养基；

2. 培养环境用新洁尔灭擦拭且UV灭菌24小时；

3. 培养试剂中加入P/S双抗；

4. 尽可能使用一次性耗材及成品培养基。

解决方案：

真菌污染较难根除，不建议保留，建议消杀后丢弃。

解决方案：

1. 丢弃所有已经污染的细胞和培养基；

2. 使用支原体清除试剂擦拭培养箱及超净工作台；

3. 培养试剂中加入支原体清除试剂；

4. 注意戴帽子和口罩；

5. 尽可能使用一次性耗材及成品培养基。

解决方案：

若细胞状态尚可，添加黑胶虫/支原体抑制剂培养2-3代可转阴；若细胞状态很差，建议消杀后丢弃。

预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法，只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度：

1.添加抗生素

2.从物品、用品消毒灭菌着手

细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

3.从操作者做起

a. 进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

b. 操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。

c. 操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。

4.防止细胞交叉污染

在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。

5.无菌室的彻底消毒

a. 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室;

b. 甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。