体内战士NK细胞如何分选和培养？（文末NK培养基限量送！）
本期内容重点：NK细胞如何分选和培养
*文末含NK细胞解决方案+限量福利
01/ 什么是NK细胞？
自然杀伤细胞（Natural killer cell，NK细胞 )，是除 T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞，不表达T细胞和B细胞所特有的膜表面分子。无需抗原的预先刺激与活化即可直接杀伤被病毒感染的自身细胞或肿瘤细胞，与抗肿瘤、抗感染和免疫调节有关，是固有免疫最重要的组成成分之一。
02/ NK细胞如何扛起体内战士大旗？
（1）NK细胞的主要功能是其杀伤靶细胞的细胞毒功能，NK细胞能通过三条途径发挥其细胞毒功能：
①NK细胞中含有大量的颗粒物，内含丰富的毒性颗粒-穿孔素（Perforin）和颗粒酶（Granzyme），这些毒性颗粒经免疫突触以脱颗粒的形式释放进入靶细胞，裂解靶细胞导致靶细胞凋亡。
②NK细胞上表达肿瘤坏死家族的配体-FASL和TRAIL，这些配体与靶细胞上表达的对应的死亡受体结合，诱导靶细胞凋亡。
③NK细胞上表达低亲和力Fc受体CD16，又称作FCγRIII，能识别和结合被抗体包被的细胞上抗体的Fc片段，通过ADCC效应（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity ，ADCC ）发挥。
（2）NK细胞还能通过分泌大量的细胞因子（主要为CD56bright），如IL10、IFN-r、GM-CSF等作用于机体中其它免疫细胞，发挥免疫调节功能。
03 / 如何获取NK细胞？
目前NK细胞主要有以下4大来源：
A.原代PB-NK来源的NK细胞
B.永生化NK细胞系
C.原代UCB-NK来源的NK细胞
D.干细胞来源的NK细胞
最常见的就是原代PB-NK来源的NK细胞，可以从健康供者的PBMC中分离出NK细胞，这个过程就推荐使用美天旎的NK Cell Isolation Kit, human（130-092-657），该试剂盒用于从人PBMC中快速、高效分离未经标记的NK细胞。非NK细胞，比如，T细胞、B细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、干细胞、血小板和红系细胞被生物素化的抗体标记。这些细胞随后用抗生物素的微球进行标记并去除，从而获得高纯度的NK细胞，分选纯度高达90%以上。
人NK细胞分选试剂盒分选流式图
经过我们客户的千锤百炼，在此给各位科研精英奉上一份小TIPS，最大限度的提升您的分选纯度，拒绝实验NG！
1）磁珠分选过程尽量在冰上操作，过柱子后也在冰上收集细胞;
2）孵育过程中，稍微轻轻晃动，使磁珠充分结合，切忌用力弹；
3）为避免分离柱频繁发生堵塞情况，将磁珠孵育好之后的混合物适当用磁珠分选Buffer稀释至更大体积；
4）为增加分选纯度，收集到的细胞可以再过一根新的分离柱。
04 / NK细胞培养并不简单
NK细胞培养过程中，经常会遇到以下3类问题：
1）外周血中NK细胞比例较低（仅5%-15%），起始扩增比例低；
2）NK细胞扩增速率低，扩增时间较长，容易耗竭，培养时需加入血清或feedercell；
3）NK细胞扩增之后很难维持其细胞毒性作用。
宝藏产品 / 美天旎NK培养基
美天旎专为NK细胞的激活和扩增而研发的培养基
可支持不同来源的NK细胞在无滋养层下快速扩增；其可从PBMC或分离好的NK细胞进行扩增；明确安全的配方可以维持NK细胞的完整功能（如细胞杀伤作用），并可减少非NK细胞的增生，可广泛应用于下游的实验应用中，让我们看看NK培养基为何如此优秀？
优越的NK细胞扩增效率
使用 PBMC 作为起始材料进行扩增 NK 细胞；与其它培养基或使用T细胞的TexMACS™培养基相比，使用NK MACS®培养基扩增的NK细胞的数量是使用其他方法扩增细胞数量的3倍。
从人的PBMC中对NK细胞扩增
▲与标准传统培养方法相比，NK MACS培养基中的NK细胞的扩增效果更好。从（A）PBMCs（n=3）或（B）分离的NK细胞（n=3）使用5% AB血清和500 IU/mL的IL-2进行NK细胞扩增，显示使用NK MACS培养基有更高的扩增率。
NK细胞优势生长，T, B, DC等非目的细胞扩增率低
使用 PBMC 作为起始材料进行扩增 NK 细胞，与其它培养基或使用T细胞的TexMACS™培养基相比，使用NK MACS®培养基培养的细胞中非目的细胞细胞（T细胞、NKT细胞）的生长和扩增数量都是更小的。
从人PBMC中对NK细胞进行14天的培养，NK细胞，T细胞，NKT细胞以及其它细胞的占比
▲从PBMC中对NK细胞进行培养，与其它培养基或用于T细胞的TexMACS™培养基相比，NK MACS培养基有利于NK细胞的扩增。美天旎NK细胞培养基的配方有效限制了非目的细胞（如T（CD3 +），NKT（CD3 + CD56 +）和其他细胞（例如CD3-CD56-））的生长。
无动物源成份
美天旎NK MACS®培养基其成分含有稳定的谷氨酰胺和酚红，且不含动物源性成分，不含抗生素。
05 / NK细胞解决方案+限量福利
限量福利活动：本次活动买NK Cell Isolation Kit, human或者NK Cell Activation/Expansion Kit, human即赠送一份NK MACS® Medium，限量10份，先到先得哦~
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