【实验室小妙招】如何提高细胞计数的准确性？

进行实验的过程中，一般在下面几种情况下，你需要知道细胞的数量在一个给定的体积。比如：

细胞计数时，确保准确度是首要要求。今天主要给大家介绍手动计数的方法。毕竟不是所有科研人都用的上自动化计数装备的！（小编也是这么过来的）

如果您的设施中没有自动化系统，您可以使用可重复使用或一次性血细胞计手动计数细胞，该血细胞计有两个刻有网格的腔体。细胞悬浮液被筛网和盖玻璃之间的毛细管作用吸进腔室，形成一层薄薄的薄膜。网格的确切大小和腔室的高度决定了已知的体积。使计算细胞密度成为可能。

如果使用可重复使用的血细胞计数器，一定要保持血细胞计和盖玻璃清洁，并小心处理，因为它们如果掉在地上很容易碎。使用前，用镜头纸擦拭血细胞计和盖玻片，以清除容易干扰细胞计数的灰尘和颗粒，并将盖玻片对准腔体上方。

用于真核细胞培养物的典型网格模式是 Neubauer 室（图 1）。血细胞计数器有两个侧面，每侧有一个 3x3 主正方形网格。每个大正方形为 1 mm x 1 mm，腔室的高度为 0.1 mm，因此每个正方形上方的液体体积为 0.1 μL。低倍显微镜（通常为 10 倍）物镜将允许其中一个正方形位于视野中。

图1 血细胞计数板

手动计数细胞，机械或数字计数器是有用的。如果您想进行活/死细胞计数(图2)，具有两个(或更多)键的差分计数器也可以工作，因此您可以同时计数多个细胞种群。

图2 计数器

首先将盖玻片对准血细胞计，用移液管装入建议的体积的未标记悬浮液或台盼蓝标记悬浮液。你应该看到液体的曲面在网格中流过每一边，但不要过度填充。液体过多会改变腔室的高度/体积，并可能导致不正确的计数。

从角落里的正方形开始。这个广场分为4×4网格16小方块。使用手动计数器，对一个较小的正方形中的单元格进行计数，并对一个模式中所有16个正方形中的单元格进行计数(例如从左到右、从左到右、从下一行、从左到右等)。为了避免重复计数，设置一个规则，如“接触小正方形的右边界或底边界的单元格计数，接触小正方形的左边界或顶边界的单元格不计数”，并确保每个正方形都遵循该规则(图3)。

图3 计数原则

常用的方法是在血细胞计一侧的四个大正方形角(1毫米)计数细胞，但你也可以计数8个大正方形(从血细胞计的两侧)或任意数量的大正方形。

如果细胞密度较高，可以使用更少的方块，如果细胞密度较低，可以使用更多的方块来获得准确的平均值。如果密度很高，你必须计数数百个细胞，尝试进一步稀释悬浮液，清洗血细胞计，并进行另一次计数。

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由于使用了新型的光学和图像分析软件技术，它能以前所未见的细节来拓展研究的边界：