细胞染色 | 如何选择荧光染料?

细胞培养后,需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行观察。由于细胞小而复杂,若不借助适当的手段,难以观察其形态、结构,更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。


目前,已有多种研究细胞的技术,从光学显微镜到电子显微镜,从一般细胞化学法到免疫化学法。细胞染色是研究细胞生物学特征的一种常用手段,然而,对于细胞实验新手来说,想要获得一张漂亮的细胞染色图并不容易。染色试剂不会选、细胞染色不均匀、染色时切片脱落等都是很常见的问题。


今天就为大家整理了几种常用细胞染色方法及染色剂选择指南,快来学习!


染色方法

染色特点及应用范围

革兰氏染色

一种重要的细菌鉴别染色法,经染色后,阳性菌呈紫色,阴性菌呈红色,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,从而用以分类鉴定。

瑞氏染色

瑞氏试剂中酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后,变成中性的伊红化美蓝,久置后,经氧化而含有天青。此三种染料分别和细胞中的NH3+和COO-等结合,使细胞核及胞浆着色。由于系中性染料,又有缓冲液调节酸碱度,所以细胞受染后,蓝红等颜色都较适中,核染质、胞浆以及其中颗粒显色较为清楚。

姬姆萨染色

病理学以及疾病研究中常用的染色剂。染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同。但该法对细胞核和寄生虫着色较好,结构显示更清晰,而细胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长,可用复合染色法。

免疫组化染色

利用抗原抗体之间的特异性结合,用于研究细胞产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移等。

表1 几种常用细胞染色方法及特点



细胞膜常用染料

PART

01


DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料(见表2),它们是一族亲脂性的荧光染料,用于细胞的形态学和结构研究。


该系列染料进入细胞膜后,会在整个细胞膜上侧向扩散,在最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高,染色均一,荧光不易猝灭,无明显细胞毒性,且受自身荧光背景干扰小。目前DiD已成功应用于多种细胞的体内示踪研究,如Treg细胞、间充质干细胞、肿瘤细胞、造血干祖细胞等。


产品名称

荧光颜色

λEx(nm)/ λEm (nm)

DiD

红色

644/663

DiR

深红色

748/780

DiO

绿色

484/501

DiI

橙色

549/565

表2 细胞膜常用染料及荧光颜色



其他细胞结构常用染料

PART

02


生物染料在细胞结构和组分鉴定中有着广泛的应用,除细胞膜研究外,我们经常也会对一些其它细胞结构及成分进行探索,例如线粒体、溶酶体、蛋白质、细胞核等,而对于不同的细胞结构有不同的染料进行染色。


产品名称

产品用途

DAPI

细胞和组织细胞核染色

TRITC-Phalloidin

选择性结合丝状肌动蛋白F-actin

用于细胞骨架研究

台盼蓝染色液

常用于检测

细胞膜完整性和细胞存活率

姬姆萨染液

用于染色体、血液、组织切片、原生动物寄生虫等

Hoechst 33342

标记DNA,也用于细胞核和线粒体的显像观察

JC-10

可以检测细胞、组织

或纯化的线粒体膜电位

吖啶橙盐酸盐

细胞周期研究,细胞培养物和组织模型的凋亡研究。也能用作溶酶体染料,但缺乏特异性。

(+)生物素-N-琥珀酰亚胺基酯

在温和条件下标记蛋白质、肽、细胞器、抗体、寡核苷酸和微珠。


NOTICE

注意事项


PART/3

1)荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测;

2)避免反复冻融,否则容易失效;

3)DAPI对人体有刺激性,注意适当防护;

4)鬼笔环肽具有毒性,需小心操作(对人的半数致死剂量 LD50 约 2mg/kg);


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创建时间:2023-09-15 09:54
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