细胞染色 | 如何选择荧光染料？

细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行观察。由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。

目前，已有多种研究细胞的技术，从光学显微镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法。细胞染色是研究细胞生物学特征的一种常用手段，然而，对于细胞实验新手来说，想要获得一张漂亮的细胞染色图并不容易。染色试剂不会选、细胞染色不均匀、染色时切片脱落等都是很常见的问题。

今天就为大家整理了几种常用细胞染色方法及染色剂选择指南，快来学习！

染色方法	染色特点及应用范围
革兰氏染色	一种重要的细菌鉴别染色法，经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。
瑞氏染色	瑞氏试剂中酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后，变成中性的伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。此三种染料分别和细胞中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆以及其中颗粒显色较为清楚。
姬姆萨染色	病理学以及疾病研究中常用的染色剂。染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同。但该法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而细胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。
免疫组化染色	利用抗原抗体之间的特异性结合，用于研究细胞产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移等。

表1 几种常用细胞染色方法及特点

细胞膜常用染料

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DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料（见表2），它们是一族亲脂性的荧光染料，用于细胞的形态学和结构研究。

该系列染料进入细胞膜后，会在整个细胞膜上侧向扩散，在最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，荧光不易猝灭，无明显细胞毒性，且受自身荧光背景干扰小。目前DiD已成功应用于多种细胞的体内示踪研究，如Treg细胞、间充质干细胞、肿瘤细胞、造血干祖细胞等。

表2 细胞膜常用染料及荧光颜色

其他细胞结构常用染料

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生物染料在细胞结构和组分鉴定中有着广泛的应用，除细胞膜研究外，我们经常也会对一些其它细胞结构及成分进行探索，例如线粒体、溶酶体、蛋白质、细胞核等，而对于不同的细胞结构有不同的染料进行染色。

产品名称	产品用途
DAPI	细胞和组织细胞核染色
TRITC-Phalloidin	选择性结合丝状肌动蛋白F-actin 用于细胞骨架研究
台盼蓝染色液	常用于检测细胞膜完整性和细胞存活率
姬姆萨染液	用于染色体、血液、组织切片、原生动物寄生虫等
Hoechst 33342	标记DNA，也用于细胞核和线粒体的显像观察
JC-10	可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位
吖啶橙盐酸盐	细胞周期研究,细胞培养物和组织模型的凋亡研究。也能用作溶酶体染料，但缺乏特异性。
(+)生物素-N-琥珀酰亚胺基酯	在温和条件下标记蛋白质、肽、细胞器、抗体、寡核苷酸和微珠。