【实验干货】骨髓单细胞悬液制备新方法
在进行流式实验时，制备出合格、分散的单细胞悬液是流式细胞术样本制备技术中重要的一环，它既要求组织分散成为单个细胞，又要维持细胞的固有属性及生物学特性。
本篇文章为大家介绍一种离心骨髓单细胞悬液制样的新方法，助力流式实验。
小鼠的骨髓单细胞悬液制备方法通常是分离小鼠股骨和胫骨内的骨髓。
首先是常用的方法：
1
颈椎脱臼处死小鼠，分离小鼠的股骨和胫骨；
2
用1ml的注射器在股骨或胫骨的两端钻孔，用PBS或者培基反复冲洗股骨和胫骨的骨髓腔，将骨髓腔内的细胞冲洗出来。重复2~3次，直至骨髓腔变白；
3
用移液枪轻轻混匀骨髓细胞，使骨髓细胞尽可能相互分离，成为单细胞悬液，并且过滤至新的离心管中；
4
离心，弃上清，裂红；
5
终止裂红，离心弃上清，去除红细胞碎片；
6
用PBS或培基重悬沉淀，进行后续流式染色。
这时有的老师就会问了：如果大批量的动物，从取材到制样的时间太久，害怕影响细胞活力，有没有其他办法？
不要担心！有文献尝试了一种改良版的骨髓单细胞悬液制备方法：离心法，并且离心收集的骨髓细胞比其他方法获得的细胞量更多，活力更高，更方便操作。各位老师们可以尝试一下哦！
新方法步骤如下：
1
处死小鼠，剥离整个下肢的皮肤和肌肉，使骨完全暴露，小心不要切断骨头；
2
通过切断髋关节上方来切除整个腿，小心不要切断股骨的顶部；
3
用低尘擦拭纸擦拭骨头，用镊子夹住股骨和胫骨，用剪刀在骨髓末端切开，露出骨髓；
4
使用18号针穿刺0.5ml ep管的底部（针尖可以点火）；
5
将四根切开的骨头放在管的底部，并在管中加入200 μl PBS；
6
将0.5ml的试管与骨一起放入一个1.5ml的试管中，6000g离心1min；
7
将0.5ml管与骨一起丢弃，将BM细胞重悬于1.5ml管中，300g再离心5min；
8
用PBS重悬，清洗骨髓细胞，通过一个40 μm的细胞过滤器过滤，裂红。
骨髓样本该如何保存？
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参考文献
Sreejit G, Nooti SK, Athmanathan B, Nagareddy PR. S100A8/A9 in Myocardial Infarction. Methods Mol Biol. 2019;1929:739-754. doi: 10.1007/978-1-4939-9030-6_46. PMID: 30710308.
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