大鼠免疫细胞流式检测panel！码住！

主持人

各位科研小能手，今天咱们来聊聊大鼠免疫细胞流式检测的“爱恨情仇”。谁来说说，做这个实验时最让你头疼的是什么？

那肯定是抗体荧光素种类少，还老缺货，挑得我眼花缭乱！

大师兄

对对对，我也是，感觉像是在玩“抗体版”的俄罗斯方块，拼拼凑凑都不够用。

二师兄

主持人

哈哈，听起来像是科研版的“极限挑战”。不过，别担心，我们今天有秘密武器——一篇关于大鼠免疫细胞流式检测Panel设计的干货文章。它不仅能帮你搞定抗体和指标选择难题，还能让你的实验方案更加“高大上”。这可是咱们的“实验宝典”，赶紧收藏起来！

本文的参考文献可以在文末下载~

▲DOI: 10.1159/000524682

Part 1 实验方案

(1) Rats：骨骼成熟的雄性 Lewis 大鼠

(2) 模型：体积肌肉损失 (VML) 模型

(3) 取材：收集受伤的（胫骨前部）TA肌肉、脾脏、胸腺和肠系膜淋巴结（MLN），并将其放入含有L-谷氨酰胺的5 mL RPMI培养基中。

(4) 消化：然后用剪刀将标本彻底切碎，并加入 5 mL 1 mg/mL LiberaseTM（Roche，S#5401127001）和 0.4 mg/mL DNase I（Roche，#10104159001）消化液。37℃，100 rpm 的培养摇床上消化。

(5) 流式细胞仪： 5 Laser Cytek® Aurora Spectral Flow Cytometer

Part 2 流式抗体

Part 3 圈门逻辑

Part 4 流式结果

Part 5 相关指标及其克隆号选择

🔷 BOX 1 B细胞

(1)CD45R （HIS24）

(2)CD45RA（OX-33）

🔷 BOX 2 T细胞

(1)Pan-T Cells：CD6（OX-52）

(2)CD3：G4.18、1F4

(3)CD4：OX-35、W3/25、OX-38

(4)CD8：OX-8、341、G28

🔷 BOX 3 单核/巨噬细胞

(1)组织中 HIS36 的特异性更好，血液中 HIS36 不表达。

(2)血液中可以用 CD68（ED1、QA20A71），但是 CD68也表达在单核细胞上，可能并不是很纯。

(3)大鼠单核细胞CD4⁺CD3^-

(4)M1: CD86（24F）、CD80（3H5）

(5)M2: CD163（HIS36、ED2、GHI/61）

▲Doi: 10.3791/54599

🔷 BOX 4 NK细胞

(1)CD161a：10/78、3.2.3

(2)CD8⁺CD3^-

🔷BOX 5 粒细胞

HIS48（单核也表达），可通过前项散射光和侧向散射光区分粒细胞和单核细胞。

🔷 BOX 6 树突状细胞

CD103: OX-62

🔷 BOX 7 通用marker

(1)CD45 （OX1）

(2)CD11b/c （OX42）

太棒啦，这篇文章真的受益匪浅。

大师兄

是啊，我还学到了不少新技巧，原来有这么多克隆号我不知道。

二师兄

主持人

看来大家都收获满满啊！希望这篇文章能成为你们实验路上的“神助攻”，让我们的大鼠免疫细胞流式检测更加顺畅、高效。科研路上，我们一起“嗨”起来！

主持人

如果对本次分享的流式方案或者在流式实验中有任何问题，都可以加入我们的流式互助群，群内有很多正在做流式实验的同学，大家可以一起交流探讨！

上下滑动查看参考文献

本文参考文献，可添加小助手，回复“ 流式1218 ” 下载！

[1] Adusei KM, Ngo TB, Alfonso AL, Lokwani R, DeStefano S, Karkanitsa M, Spathies J, Goldman SM, Dearth CL, Sadtler KN. Development of a High-Color Flow Cytometry Panel for Immunologic Analysis of Tissue Injury and Reconstruction in a Rat Model. Cells Tissues Organs. 2023;212(1):84-95. doi: 10.1159/000524682. Epub 2022 Apr 22. PMID: 35462366.

[2] Rubio-Navarro A, Guerrero-Hue M, Martín-Fernandez B, Cortegano I, Olivares-Alvaro E, de Las Heras N, Alía M, de Andrés B, Gaspar ML, Egido J, Moreno JA. Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry. J Vis Exp. 2016 Oct 18;(116):54599. doi: 10.3791/54599. PMID: 27805599; PMCID: PMC5092211.

加入社群