经验分享 | 小鼠NK细胞磁珠分选攻略

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背景

NK细胞(自然杀伤细胞)是固有免疫系统的一部分。最初,NK细胞因其无需预先致敏就能直接杀死肿瘤细胞而为人所知,而现在已经知道NK细胞参与多种免疫反应,包括宿主对病毒、寄生虫、细菌和肿瘤细胞的防御;NK细胞在干细胞移植和妊娠中也起着重要作用。NK细胞通过介导直接细胞裂解或产生大量细胞因子来执行其效应功能。尽管NK细胞通常在小鼠脾脏中研究,但它们也存在于其他器官中,如胸腺、肺和肝脏。


NK细胞主要在骨髓(BM)中发育,其发育过程已被逐步剖析,从定向祖细胞(NKP:Lin−/CD122+/NK1.1−/CD49b−)到未成熟NK细胞(iNK:NK1.1+/CD49b−CD11blow/CD51low)到成熟的NK亚群(mNK:CD49b+/Ly49s+)。



 脾脏和淋巴结


NK细胞占脾脏组织中总淋巴细胞的1-2%:


NK细胞占淋巴结中总淋巴细胞的不到1%:


NK细胞谱系的关键标志物是CD27,它是肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的一员。CD27的表达与整合素链CD11b相结合,定义了NK细胞的四个连续发育阶段:CD11blowCD27low、CD11blowCD27high、CD11bhighCD27high和CD11bhighCD27low亚群。


这些NK细胞亚群在组织分布上存在显著差异。CD11blowCD27high NK细胞主要存在于骨髓和淋巴结中,而CD11bhighCD27low NK细胞在血液、脾脏、肺和肝脏中更为丰富,双阳性CD11bhighCD27high NK细胞则分布更为均匀。



样本制备:

小鼠NK细胞的主要来源是脾脏和淋巴结的单细胞悬液,这些悬液可用于多种下游应用,包括细胞亚群的分离、细胞培养或流式细胞术分析。大部分人会选择研磨加裂红的方法制备单细胞悬液,也可以使用gentleMACS™解离器和专用的组织解离试剂盒来全自动进行解离。所有小鼠NK细胞应保存在添加有IL-2的培养基中。


磁珠分选:



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结果:

从脾单细胞悬液中分离NK细胞结果:


小鼠脾脏NK细胞的阳性筛选结果:


指标:




其他器官


NK细胞广泛分布于淋巴组织和非淋巴组织中。在大多数这些组织中,NK细胞仅占淋巴细胞总数的很小一部分,从小鼠脾脏中的2%到小鼠肺中的10%。此外,不同的小鼠品系之间存在差异。


NK细胞在外周器官中的存在,可能是由趋化因子介导的从外周血迁移到这些器官中的结果。NK细胞表达几种趋化因子受体,包括CCR2、CCR5、CXCR3和CX3CR1,这些受体有助于将特定的NK细胞靶向到相关的趋化因子产生器官。




参考文献:

https://www.miltenyibiotec.com/CN-en/resources/macs-handbook/mouse-cells-and-organs/mouse-cell-types/nk-cells-mouse.html#228890df-5b01-49a5-aab2-006b826c3fd6


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创建时间:2025-03-14 11:46
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