17色方案 | 流式mouse Th检测必读：OMIP-111标准化flow流程
本研究针对小鼠脾脏T细胞亚群的深度免疫表型解析及功能表征需求，特别设计与优化了包含17个检测参数的流式细胞分析方案。
在T细胞中，功能性细胞因子（IFNγ、TNF及IL-2/4/5/17）通过介导感染或免疫后的固有免疫应答启动，同时搭建适应性免疫应答的桥梁，最终赋予宿主长效保护性免疫。阐明这些效应性细胞因子对机体免疫应答的调控机制具有重要科学价值。
本优化检测方案可系统分析Th1型（IFNγ、TNF、IL-2）、Th2型（IL-4、IL-5）及Th17型（IL-17）细胞因子分泌特征。此外，该方案还可精准鉴定B细胞（B-1与B-2亚群）、NK细胞、γδ T细胞、NKT细胞及γδ NKT细胞等关键免疫调节细胞亚群。为确保方案的生物医学研究普适性，采用两种主流实验小鼠品系（C57BL/6与BALB/c）的脾细胞，分别在稳态生理条件及体外经PMA/离子霉素刺激条件下进行了系统性验证。
01
概述
OMIP | 111 |
题目 | Immune-Profiling of T Helper 1 (Th1), Th2, and Th17 Signatures in Murine Splenocytes by Targeting Intracellular Cytokines |
Panel | 17色 |
目的 | 小鼠Th1、Th2和Th17胞内因子高维分析方案 |
细胞类型 | 10-12周C57BL/6与BALB/c小鼠的脾细胞 |
流式细胞仪 | Sony ID7000：5 lasers (355nm, 405nm, 488nm, 561nm and 637nm) |
对照 | FMO |
关键词 | Murine splenocytes, Spectral flow cytometry, Th1 cells, Th2 cells, Th17 cells, Mitogen, Murine T cells, Sony ID7000 |
02
17色panel
03
结果
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CD3+ T细胞
γδT cells（TCRγδ+ NK1.1−/NKp46−）, NKT cells(TCRγδ− NK1.1+/NKp46+), γδNKT (TCRγδ+ NK1.1+/NKp46+), Tcon (TCRγδ− NK1.1−/NKp46−下圈CD4+和CD8+)
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Th1、Th2细胞
在未刺激和刺激条件下，检测到Th1（IFNγ+、TNF+、IL-2+）、Th2（IL-4/5+）和Th17（IL-17+）细胞的分布
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记忆T细胞表型
通过CD44和CD62L标记，区分了效应记忆T细胞和中央记忆T细胞。Effector memory (CD44+ CD62L−)，central memory (CD44+ CD62L+) ，naive (CD44− CD62L+)
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B细胞
B-1 cells (CD19+ CD45R−)和B-2 cells (CD19+ CD45R+)
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NK细胞
CD45+ CD19− CD45R− CD3− NK1.1+/NKp46+
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UMAP分析
展示了稳态和刺激条件下小鼠脾细胞的免疫细胞群体分布
C57BL/6
BALB/c
FMO对照
FMO的全称是Fluorescence minus one，意思是流式Panel中的所有荧光抗体减去单个荧光抗体后染色细胞样本，通常对于表达丰度低或连续表达的抗原，才有必要设置FMO。如果样本管需要刺激阻断、固定破膜等操作，FMO中对应抗体也需要做一样的操作。
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