必看！搞懂树突状细胞：DC定义/鉴别/亚群/功能/解决方案！
今天小福带您畅游树突状细胞知识海洋，简直是DCs的初识宝典！开篇三问带您了解DCs究竟是何种细胞，继以小鼠为例解析DCs亚群、组织分布和对应功能，最后超级干货总结DCs实验解决方案，包括流式和骨髓源树突状细胞（BMDCs）培养方法！文末还可获取超细致文档资料，赶快同我一探究竟吧！
一
基本介绍
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什么是树突状细胞？
树突状细胞（dendritic cells, DCs），是从脾脏中分离出来的一类与粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞形态和功都不同的白细胞，因其细胞膜向外伸出，形成与神经细胞轴突相似的膜性树状突起，故而命名为树突状细胞。DCs是体内功能最强的专职抗原递呈细胞（Antigen presenting cells, APC），能够高效地摄取、处理、加工和递呈抗原，是唯一一种能够启动naïve T细胞的APC。
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树突状细胞如何鉴别？
严格鉴别DC有三个标准：
▶ 典型的树突状形态
▶ 高表达MHC II类分子和其他共刺激分子
▶ 能移行至淋巴器官刺激初始T细胞活化
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如何判定DC是否成熟？
往期推荐：新视角：树突状细胞的平衡与稳态
二
树突状细胞的细胞亚群
（以小鼠为例）
机体内的树突状细胞包括浆细胞样树突状细胞（PDCs）、典型的或组织驻留的树突状细胞（cDCs）、迁移的树突状细胞、单核细胞衍生的树突状细胞（Mo-DC）和朗格汉斯细胞（LS）。
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脾脏和淋巴结中的DCs
小鼠淋巴器官中存在三类DCs亚群：浆细胞样树突细胞（pDC）和两个经典/髓系树突细胞亚群（cDC1与cDC2）。
a. 脾脏和淋巴结中DCs标志物和占比情况
b. 组织驻留型DC和迁移型DC的异同
c. 滤泡树突状细胞
需要注意的是，还有一类不属于白细胞，也不是起源于骨髓前体细胞的DC称为滤泡树突状细胞（Follicular DC, FDC），FDC不表达MHC II类分子，但是高表达Fc受体和补体受体，参与B细胞免疫记忆的维持。
滤泡树突状细胞则是常规的老细胞（类似皮肤细胞或肝细胞），随着胚胎的发育，它们在二级淋巴器官中选定了它们的最终位置。事实上，滤泡树突状细胞在妊娠中期已经存在。滤泡树突状细胞和抗原呈递树突状细胞不仅起源大不相同，而且这两种海星形状的细胞还具有非常不一样的功能。树突状抗原呈递细胞的作用是通过MHC分子将抗原呈递给T细胞，而滤泡树突状细胞的功能是将抗原呈递给B细胞。
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其他组织中的DCs
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小鼠DCs细胞分选kit
三
DC细胞解决方案
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DC细胞流式marker
往期推荐：树突状细胞(DC)流式解决方案（文末扫码领取干货！）
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骨髓源树突状细胞（BMDCs）
DCs存在于体内多种组织中，但含量很少，无法满足科学研究和临床治疗的需要，所以采用体外培养和扩增DCs，而对于小鼠，最常见的方法是从骨髓细胞诱导产生DCs，即BMDCs，通过特定细胞因子体外培养骨髓祖细胞获得。
注
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复刻BMDCs方法
参考文章（doi:10.21769/BioProtoc.5278）
a. 小鼠骨髓细胞分离——骨髓冲洗与收集
(1) 预冷FACS缓冲液10 mL加入100 mm培养皿
(2) 锋锐剪刀截断股骨/胫骨两端骺端
(3) 镊子悬持骨骼，用25G针头注射器（预装2 mL冷FACS缓冲液）冲洗骨髓至培养皿
→ 终点判断：骨骼呈瓷白色（提示骨髓腔细胞完全排出）
(4) 收集细胞至15 mL离心管，4℃ 300×g离心5 min
(5) 弃上清，加3 mL预冷红细胞裂解液，重悬，冰上孵育3-4 min
(6) 加3 mL RPMI终止裂解，4℃ 300×g离心5 min
(7) 弃上清，RPMI 3 mL重悬细胞
关键观察：
①合格沉淀：均质乳白色
②需重复裂解：沉淀泛红（提示红细胞残留）
(8) 血细胞计数板进行细胞计数（力显细胞计数仪）
b. 体外诱导
(1) 细胞接种
取1.0–1.5×10⁷骨髓细胞，重悬于15 mL含5 ng/mL GM-CSF与IL-4的RPMI培养基，接种至100 mm培养皿。
(2) 初始培养
37℃、5% CO₂培养箱中培养48小时。
(3) 半量换液（第3天）
吸弃5 mL旧培养基，补充5 mL含等浓度GM-CSF/IL-4的新鲜RPMI培养基。
(4) 形态确认（第6天）
显微镜下观察树突状突起细胞。
(5) 去除悬浮细胞
吸弃全部悬浮细胞及上清液（仅保留贴壁细胞）。
(6) 细胞收集
①加入5 mL RPMI培养基
②用细胞刮刀轻柔刮取贴壁细胞（可用Accutase消化液消化，不需血清终止，温和消化）
③显微镜确认细胞完全脱落
(7) 离心洗涤
细胞悬液转移至15 mL离心管，室温300×g离心5分钟。
(8) 终悬液制备
离心沉淀用3 mL RPMI重悬，获得可用于染色的BM-DCs。
此外，该文章还做了OT1细胞和BMDC的共培养实验，如有需要了解可以参考原文。
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参考文献
可点击文末阅读原文或复制链接至浏览器打开：https://www.miltenyibiotec.com/CN-en/support/macs-handbook/mouse-cells-and-organs/mouse-cell-types/dendritic-cells-mouse.html
END
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